1982年,kaufman等人依據(jù)DHFR的擴(kuò)增原理設(shè)計(jì)了哺乳動物細(xì)胞(CHO)表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)雜糖蛋白表達(dá),它是目前最廣泛應(yīng)用的表達(dá)體系。CHO表達(dá)系統(tǒng)具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能,表達(dá)的蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面最接近于天然蛋白分子;即可貼壁生長,又可以懸浮培養(yǎng);具有遺傳的穩(wěn)定性和可重復(fù)性;純化工藝簡單,應(yīng)用前景廣泛。但是也存在目標(biāo)蛋白表達(dá)量低;篩選穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞株周期長、難度大;規(guī)模化生產(chǎn)成本高等難點(diǎn)。
本公司在多年的工作和研究中形成了自己的特點(diǎn)和優(yōu)勢:
1、高效篩選工程細(xì)胞株的方法:在篩選穩(wěn)定高效表達(dá)目標(biāo)蛋白的工程細(xì)胞株等方面,建立了周期短、效率高的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,周期由通常的1年半縮短到1年;
2、培養(yǎng)過程的可控性:考慮細(xì)胞培養(yǎng)的復(fù)雜性,建立了標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,規(guī)范細(xì)胞培養(yǎng)過程、具有可追溯性;
3、采用連續(xù)灌流培養(yǎng)工藝,細(xì)胞密度可達(dá)108cells/ml,目標(biāo)蛋白獲得高表達(dá),收獲培養(yǎng)上清的體積是生物反應(yīng)器體積的60~80倍,大大降低了生產(chǎn)成本。